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2 x SYBR Green qPCR Mix(Antibody，ROX)

产品规格：

产品介绍：

本体系是用于染料法（SYBR Green I）实时荧光定量的预混体系。产品含有优化浓度的HotStart Taq DNA Polymerase、dNTPs、Mg2+、反应缓冲液和稳定剂等成分。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后cDNA靶序列的检测，如基因表达分析，拷贝数分析，适用于不同类型荧光定量PCR。

本体系为2×SYBR Green qPCR(Antibody)专用预混液，使用时只需加入模板、引物和水，使其工作浓度为1×,即可进行反应。精心研制的抗体法热启动Taq酶，配合反复优化的Buffer，增强了在低浓度和复杂模板上的扩增效率，具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可最大限度地减少人为误差、节约PCR实验操作时间、降低污染几率。

产品存储：

－20 ℃ 避光保存至少6个月，使用前充分融解混匀。短期使用可放在4 ℃，避免反复冻融。

产品特点：

1. 适用于2×SYBR Green qPCR专用预混液，可以快速，准确地对目的基因进行分析，如基因表达分析，拷贝数分析，适用于不同类型荧光定量PCR。

2. 即用型2×预混荧光定量mix，PCR反应配置时，只需加入预先设计好的上下游引物，模板和灭菌蒸馏水即可进行反应，使用方便。

3. 95℃ 3min完全热启动，完全避免了非特异性反应的发生，配合反复优化的Buffer，增强了在低浓度和复杂模板上的扩增效率，具有扩增效率高，扩增灵敏度高，扩增特异性好等特点。

实验步骤：

1．反应液的配置分装，务必使用无污染的新吸头，EP管，尽量避免污染。

2．溶解所有用到的试剂，轻柔上下颠倒混匀，短暂瞬时离心将溶液甩至管底；

3．按下列组份配制qPCR混合液，将除模板以外的试剂混成mix，再分装到单个PCR管内，最后加入模板DNA。

建议PCR条件:(以25，50 μl反应体系为例，反应液配制请在冰上进行)

4．短暂瞬时离心后放入荧光定量PCR仪中运行，qPCR反应程序如下：

*当两步法扩增效率不好的时候建议选择三步法进行qPCR反应：

说明：本制品兼容性强，适用于不同厂家、型号的荧光定量PCR仪，绝大多数情况下使用二步法和三步法均可获得良好效果。在实际使用中可以根据机型推荐和具体情况对程序加以微调。一般来说，二步法扩增特异性高，三步法扩增效率高。如果融链曲线较差，可以尝试两步法扩增；若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试加长延伸时间或者进行三步法PCR扩增。

注意事项：

1．反应液的配置分装，务必使用无污染的新吸头，EP管，尽量避免污染。
2．解冻2 x SYBR Green qPCR Mix(Antibody)，上下颠倒轻轻混匀混合，避免气泡，瞬时低速离心后使用。
3．引物终浓度应在0.1-0.6μM之间进行调节。一般情况下，终浓度为0.2μM的引物可以得到较好的结果；
4．模板量：对于基因组DNA模板量用量10ng-100ng；对于模板是反转后得到的cDNA，使用体积不超过qPCR反应液总体积的1/10，即20ul体系建议最多加入2ul cDNA，以此类推。
5．变性时间设置：建议预变性时间设为95℃，3min，复杂或高GC模板适当延长时间至5 min，变性时间设为95℃，10 sec，具体可根据实验调整。
6．退火温度和时间设置：请根据引物的Tm值和目的基因的长度进行调整，退火温度和时间设置。
7．50×ROX Reference Dye用于校正加样孔之间的体积误差和荧光信号误差，不用Reference Dye校正的qPCR扩增仪器，使用时无需添加ROX。使用于以下荧光定量仪器，50×ROX Reference Dye使用方法如下：

8．qPCR实验时，在配置反应孔Mix之前，每1ml Mix中加入40ul 50×ROX或者4ul 50×ROX(qPCR实验仪器型号决定加入体积），用1ml移液器轻轻混匀。